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PCR儀的擴增產物出現多條帶問題解析

發布時間: 2020-10-23  點擊次數: 3005次
   PCR儀是利用DNA聚合酶用于擴增特定的DNA的片段,對特定基因做體外大量合成,可以將一段基因復制為原來的百億至千億倍。利用酶融合技術,梯度PCR儀可獲得更快、更好結果;其可靈活配備96和384孔加熱模塊并具優異的梯度功能,用于加速實驗方案開發。7"高分辨率觸摸屏,配備智能向導,幫助您根據實驗室條件創建適合的PCR實驗方案。
  PCR儀的擴增產物出現多條帶,這是怎么回事呢?
  1.引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。
  2.循環的次數過多。適當增加模板的量,減少循環次數。
  3.酶的用量偏高或酶的質量不好,應降低酶量或調換另一來源的酶。
  4.退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優化退火溫度。
  5.樣品處理不當。
  6.Mg2+濃度偏高,因適當調整Mg2+使用濃度。
  7.若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質量有問題。
  8.復制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發生。冰上準備反應體系或采用熱啟動聚合酶。
  9.反應緩沖液未*融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化*并*混勻。
  10.引物特異性差。檢查引物特異性或重新設計引物。
  11.引物量過多。減少反應體系中引物的用量。
  12.模板量過多。質粒DNA的用量應<50ng,而基因組DNA則應<200ng。
  13.外源DNA污染。確保操作的潔凈。
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